发表时间：2025-02-27
 

3.1 T-2毒素降低生长性能并诱导脾损伤

4组肉鸡的初始体重没有差异（图1A）。经过2周的试验处理后，添加1.0mg T-2毒素/kg的日粮有降低（P=0.06）体重（12.4%）的趋势，添加3.0和6.0mg/kg的日粮有降低（P<0.05）最终体重（17.6–27.2%）的趋势（图1A）。在不同剂量下，饮食中T-2毒素补充≥1.0 mg/ kg可使体重增加减少13.7–30.2%（P< 0.05）（图1B）。此外，组织学结果显示，日粮补充T-2毒素诱导免疫组织损伤（图1C）。具体而言，与对照组相比，日粮添加T-2毒素≥1.0 mg/kg诱导脾淋巴细胞减少、网状上皮细胞增生和轻度充血，尤其是添加6.0 mg/kg T-2毒素的日粮诱导严重充血和巨噬细胞增生。同时，T-2毒素引起淋巴细胞坏死和耗竭、局灶性坏死、皮质淋巴细胞增殖、胸腺血管充血和法氏囊完整性的丧失。此外，T-2毒素诱导脾脏氧化损伤，与对照组相比，随着日粮T-2毒素剂量的增加，MDA和PC浓度分别增加55.7-97.3%和182.0-393.1%（P<0.05），T-AOC分别减少24.3-35.9%（P<0.05），呈剂量依赖性（图1D-F）。

3.2 T-2毒素对盲肠菌群稳态的影响

为更好地了解T-2毒素对盲肠细菌组成的影响，对对照组和实验1中6.0 mg/kg T-2毒素组肉鸡进行了16 S rRNA微生物基因的高通量测序（图2）。根据序列相似性（>97%）将符合条件的序列聚类为OTU，T-2毒素处理组中OTU数量较少，两组共有499个OTU（图2A）。基于分类学组成分析，T-2毒素改变了盲肠细菌在门和属水平上的相对丰度。所有来自盲肠食糜样品的合格序列归属于7个已知门。在所有样品中，以厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门和软壁菌门为优势菌门（图2B）。与对照组相比，添加6.0mg/kg的T-2毒素可显著降低厚壁菌门和软壁菌门的丰度，提高拟杆菌门和变形菌门的丰度；并从所有合格序列中鉴定出50个优势属，包括拟杆菌属、嗜双歧杆菌属、乳杆菌属、粪大肠杆菌属和示波螺旋菌属（图2C）。微生物区系的α多样性通过Chao 1分析评估物种丰富度，Shannon指数评估物种均匀度。与对照组相比，在日粮中添加6.0 mg T-2毒素/ kg不会影响Chao 1指数（图2D），但会降低Shannon指数（图2E）。为确定两组之间不同的细菌分类群，使用了LDA>3的LEfSe分析。结果在对照组和T-2毒素组的微生物群中分别鉴定了8个和2个区别性特征（图2F）。此外，菌属的丰度显示，与对照组相比，T-2毒素组中的Blautia、Coprococcus、Lachnospira、Coprobacillus、Anaerostipes 属的丰富度显著减少；然而，与对照组相比，在T-2毒素处理下，Fusibacter丰度显著增加（图2L）。

图2：日粮T-2毒素对盲肠微生物组的影响。A对照组和6.0 T-2组中OTU的数量。B门水平的肠道细菌分布。C属水平的肠道细菌分布。D和E T-2毒素对Chao 1指数的影响。E T-2毒素对Shannon指数的影响。F线性判别分析（LDA）效应大小（LEfSe）微生物群组成分析。G-L Blautia、Coprococcus、Lachnospira、Coprobacillus、Anaerostipes 、Fusibacter相对丰度。对照，基础饮食；6.0 T-2，基础日粮添加6.0 mg/kg T-2毒素。

3.3 T-2毒素对脾脏转录组的影响

为进一步揭示T-2毒素的毒性机制，对实验1的肉鸡脾脏组织进行了转录组分析。差异表达（DE）分析结果表明，T-2毒素处理的肉鸡脾脏中存在T-2毒素处理应答基因（图3）。与对照组相比，在日粮中补充1.0、3.0和6.0mg/kgT-2毒素时，分别有2489、1943和3936个基因表现出1.5倍或更高（P<0.05）的DE（图3A-C）。值得注意的是，在不同的T-2毒素剂量下，有907个基因具有相似的变化（图3D）。此外，GO和KEGG通路分析确定了共表达的DEG。主要GO类别的不同分布如图3E所示。在生物过程（BP）类别中，丰富了细胞周期、防御反应、免疫系统过程、对生物刺激的反应和对应激的反应。在细胞化合物（CC）类别中，染色质、染色体、胞外区细胞外空间和超分子复合物是GO富集。CCR趋化因子受体结合、CCR 6趋化因子受体结合、趋化因子活性、趋化因子受体结合和蛋白质异二聚体活性也是GO表达最多的类别。KEGG富集结果表明，KEGG的主要通路包括细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号通路、核苷酸寡聚化结构域（NOD）样受体信号通路、IL-17信号通路、细胞坏死、凋亡-多物种、细胞因子生长因子和Janus激酶（JAK）-信号传导子和转录激活子（STAT）信号通路（图3F）。

图3 ：T-2毒素对脾脏转录组的影响。A-C火山图分别显示1.0 T-2、3.0 T-2、6.0 T-2毒素与对照中的DEG。D维恩图分析1.0 T-2毒素与对照、3.0 T-2毒素与对照、6.0 T-2毒素相对于对照DEG数量。E GO功能富集分析。F KEGG途径富集分析，对照，基础饲料; 1.0 T-2、3.0 T-2和6.0 T-2，基础饲料添加1.0、3.0和6.0 mg/kg T-2毒素。

3.4 转录组和微生物组联合分析揭示T-2毒素对脾脏的毒性机制

DEG与最丰富的细菌属的相关性分析表明，有17个DEG与10个属的DEG具有显著的相关性（图4A）。其中，Faecalibacterium_prausnitzii和Ruminococcus与大多数基因相互作用最高。此外，在KEGG途径分析中具有显著相关性的这些DEG的注释途径主要与炎症反应和免疫调节有关，包括ECM-受体相互作用、JAK-STAT信号传导途径和细胞因子-细胞因子受体相互作用（图4B）。基于筛选的KEGG富集途径，利用Western blot分析JAK-STAT信号通路在T-2毒素对肉鸡脾脏的影响中的作用（图4C和D）。值得注意的是，与对照相比，日粮补充1.0、3.0和6.0 mg T-2毒素/kg均增加了（P<0.05）JAK 2、JAK 3和c-Jun-N-末端激酶（JNK）的蛋白生成。对照组相比，3.0和6.0 mg T-2毒素/kg组显著增加（P<0.05）STAT 1、IL-6和p53蛋白的表达。有趣的是，6.0 mg T-2毒素/kg组的脾中p-STAT 1表达比其他三组低。然而，BCL-2的蛋白质产生不受日粮T-2毒素剂量的影响（P>0.05）（图4C和D）。

图4：转录组与微生物组的联合分析。A属与DEG之间的Pearson相关性分析。B KEGG途径富集分析DEG与属显著相关性。C参与JAK-STAT信号通路的蛋白相对丰度。D参与JAK-STAT信号通路的蛋白的相对丰度。

3.5 硒和T-2毒素对生长性能、脾脏氧化还原状态和组织病理学的影响

四组肉鸡的初始体重差异不显著（图5A）。在3周的实验处理后，与BD组相比，日粮T-2毒素补充降低了（P<0.05）终末体重（20.1%），体增重（21.9%），采食量（13.7%）和增重/饲料（9.2%），而补硒（添加硒为单质纳米硒，由北京德元顺生物科技有限公司提供）减轻了T-2毒素引起的这些变化（图5B-E）。与BD组相比，BD +T-2组增加了（P<0.05）GPX活性，BD+Se+T-2组降低（P<0.05）MDA含量。且与BD+T-2组相比，BD+Se+T-2组GPX活性升高（P<0.05）。然而，TrxR活性不受日粮Se缺乏和T-2毒素补充的显著影响（图5H）。除GPX活性外，没有观察到Se和T-2毒素之间的相互作用。此外，脾组织学结果显示，日粮T-2毒素诱导的脾损伤，这是由淋巴细胞数量减少和组织细胞增殖的减少所表明（图5I）。单独硒缺乏也可引起脾淋巴细胞减少和组织细胞增殖能力下降，而BD+Se组未见明显病理改变。

图5：日粮硒水平和T-2毒素对生长性能（A-E）、脾脏氧化还原状态（F-H）和组织病理学（I）的影响。BD：基础日粮; BD+T-2：BD +1.0 mg T-2毒素/kg; BD+Se，BD +0.2 mg Se/kg; BD+T-2+Se：BD +1.0 mg T-2毒素/kg和0.2 mg Se/kg。

3.6 硒和T-2毒素对JAK-STAT信号介导的炎症和细胞凋亡的影响

在与JAK-STAT信号转导介导的脾脏炎症和凋亡相关的9个基因中，有6个基因受到日粮T-2毒素或Se的影响。与BD+Se组相比，BD和BD+T-2组增加（P<0.05）JAK 3、STAT1、STAT3、p53和JNK的mRNA水平，但降低BCL-2的mRNA水平。值得注意的是，日粮T-2毒素补充加重了缺硒组JAK3、STAT3、p53和JNK mRNA丰度的增加，而补硒缓解了这些变化。此外，T-2毒素和硒对脾脏中（IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA丰度没有影响（P>0.05）。然而，就这些基因的mRNA水平而言，没有观察到Se和T-2毒素之间的相互作用。

WB结果显示，脾组织中Jak3，P-Stat1，P53，STAT1，IL-6，Cleaved-Caspase 3，Bax，Bax-XL和Bcl-2的蛋白表达均受到影响日粮T-2毒素、硒及其交互作用的影响（P<0.05）（图6B和C），其中，T-2毒素对脾脏IL-6、STAT1、p53、Cleaved-Caspase 3、Bax，Bcl-2和Bcl-XL的影响最大（P<0.05 ），其中4种（包括IL-6、STAT1、cleaved-caspase 3和BCL-2和JAK3受硒的影响。值得注意的是，日粮中添加硒减轻了（P<0.05）T-2毒素引起的JAK3、STAT1、cleaved-caspase 3和BCL-2的变化。脾脏STAT1、cleaved-caspase 3和BCL-2表达受到T-2毒素和硒之间的相互作用影响（P<0.05）。

图6：日粮硒水平和T-2毒素对鸡脾脏中JAK-STAT信号通路介导的炎症和凋亡相关基因表达的影响。A JAK-STAT信号通路相关基因的相对mRNA水平。B JAK-STAT信号通路相关蛋白表达。C. JAK-STAT信号通路中涉及的蛋白质的相对丰度。BD：基础饮食; BD+T-2：BD加1.0 mg T-2毒素/kg; BD+Se：BD + T-2+Se：BD+T-2毒素1.0 mg/kg + Se 0.2 mg/kg。